⑴栽培原料

雞腿菇是草腐菌，秸稈、棉籽殼、廢棉等都是雞腿菇的培養材料，但要求先發酵腐熟，且發酵的質量與其產量有直接關系。另外，栽培草菇、金針菇的下腳廢料也可作為雞腿菇的培養料，而且不需要發酵，直接打碎就可裝袋。

⑵栽培料發酵

先將棉籽殼或廢棉充分預濕透，然后建堆發酵，堆寬1.5米，高1.5米，長度不限。共翻堆3次，程式5-4-3。翻堆時要充分耙松打碎，翻堆后要在料堆腰部打通氣洞，通氣洞間距40厘米，防止料堆發生厭氣。發酵好的料應顯深咖啡色，有特殊的菌香味。

⑶培養料配方

A)    棉籽殼（腐熟料）80公斤、麩皮20公斤、石灰4.5公斤，料水比1：1.1～1.2。

B)    棉籽殼（腐熟料）80公斤、廢棉（腐熟料）40公斤、玉米粉4公斤、麩皮6公斤、石灰4.5公斤，料水比1：1.1～1.2。

C)    草菇菌糠60公斤、棉籽殼20公斤、麩皮20公斤、石灰3.5公斤，料水比1：1.1～1.2。

D)    金針菇菌糠50公斤、棉籽殼30公斤、麩皮20公斤、石灰5公斤，料水比1：1.1～1.2。

⑷裝袋、滅菌、冷卻、接種

采用20×45厘米的塑料簡筒，將筒袋一頭用塑料絲扎緊，然后從另一頭裝進培養料，要求袋料松緊適度，即兩頭緊、中間松，袋壁緊，袋心松，料裝好后扎緊袋口。滅菌方法與原種要求相同，由于菌袋較大，滅菌的時間應適當延長，否則滅菌不徹底。滅菌的菌袋放到接種室冷卻至28℃，接種前須用臭氧發生器進行消毒滅菌，20分鐘以后即可在接種室進行開放式接種。菌袋兩頭接種，并放置無菌棉塞扎好，有利菌袋內外氣體交換。